Testez un nouveau lot de milieux de culture en parallèle avec un lot précédemment validé. La moyenne des colonies sur le nouveau lot doit être dans un facteur 2 de la moyenne sur le lot précédemment validé. En effectuant ce test, la seule variable est le milieu de culture. La suspension de micro organismes, les conditions environnementales et le technicien sont les mêmes.
Exemple : Résultats de l’ancien lot compris 35 et 45 CFU (moyenne 40 CFU), les résultats du nouveau lot devront être compris entre 20 et 80 CFU.
Pour déterminer si un nouveau lot de milieux liquides est acceptable, testez en parallèle le nouveau lot, le lot précédemment validé et un milieu gélosé non sélectif type TSA. Le TSA est nécessaire pour déterminer la concentration en CFU de l’inoculum.
Le nouveau lot est acceptable si :
• Il est comparable à la turbidité du lot précédemment validé.
• Le nombre de colonies sur le TSA répond aux spécifications (100 colonies ou moins).
(Vous retrouverez nos conseils concernant l’utilisation de vos pipettes dans un futur post).
Que vous utilisiez une solution calibrée prête à l’emploi ou une préparation « maison », il est très important d’avoir une solution homogène. Utilisez et abusez de votre vortex !
Avant d’étaler votre suspension à l’aide d’un râteau, vérifiez que votre gélose soit sèche. Attention, pas sèche comme le Sahara, mais pas trop humide. Ce conseil est particulièrement important pour les boites contact 55mm. Si vos géloses sont trop humides, vous pouvez les « sécher » quelques minutes sous PSM.
Les souches d’E. coli et P. aeruginosa sont très sensibles. Lors des tests de fertilité, l’étalement sur boite de Pétri doit être le plus doux possible. Nous vous recommandons de ne pas « ratisser » jusqu’à ce que la gélose soit complétement sèche, sinon vous risquez de perdre beaucoup en termes de recouvrement. A vos râteaux !
Si vous utilisez une méthode par inclusion, n’utilisez pas vos milieux fondus à plus de 45°C ! Une température plus élevée (même 1°C !) nuira à votre recouvrement. Nous avons vu des Pseudomonas aeruginosa passer de 35 cfu à 0 cfu pour une différence de 2°C.
-La gélose fondue ne doit pas être conservée dans le bain marie pendant plus de trois heures.
-La gélose stérile solidifiée ne peut être fondue qu’une seule fois.
Pour vous assurer que vos milieux de culture sont capables de faire pousser les souches que vous retrouvez régulièrement dans vos environnements de production, nous vous conseillons d’utiliser ces souches « usine » lors de vos contrôles de fertilité. Ces souches « usine » peuvent être :
-Soit conservées dans un souchier à -80°C, il faut s’assurer de la pureté, de la conservation et surtout de la traçabilité (5 passages maximum).
-Soit calibrées et lyophilisées chez un fabricant (exemple : souches personnalisées chez Microbiologics).
Vous souhaitez vous préparer à une inspection (ANSM, FDA…) ? Rassurez-vous ! Nous sommes là pour vous épauler. Nous pouvons planifier ensemble une formation au sein de votre laboratoire, pour valider les bonnes pratiques, et pour bannir les mauvaises ! Bénéficiez de nos retours d’expériences sur les souches personnalisées, vous aurez également la possibilité de faire des manipulations (avec ou sans souche). N’hésitez pas à nous contacter via le formulaire de contact en bas de page !
Microbiologics propose quatre produits conçus spécifiquement pour les tests de fertilité. Ces souches sont calibrées pour fournir 10-100 CFU par 0,1 ml de suspension hydratée. Chaque produit offre différentes fonctionnalités et avantages :
N’hésitez pas à envoyer vos remarques et commentaires à l’adresse suivante : contact@abioexpertise.com
Merci à Microbiologics !
